Các yếu tố quyết định hiệu quả tổng hợp DNA

Trong quá trình tổng hợp DNA, RNA và axit nucleic phi tự nhiên điển hình, bước Khử bảo vệ và Ghép nối đóng vai trò quan trọng.

Bước loại bỏ bảo vệ là loại bỏ nhóm DMT trên chất mang rắn hoặc nhóm hydroxyl 5' trên nucleoside trước đó bằng axit hữu cơ và cho nhóm hydroxyl tiếp xúc với bước ghép nối tiếp theo.Axit trichloroacetic 3% trong dichloromethane hoặc toluene chủ yếu được sử dụng để thực hiện bước loại bỏ bảo vệ.Nồng độ axit trichloroacetic và thời gian khử bảo vệ (thời gian khử tắc nghẽn) quyết định độ tinh khiết của sản phẩm cuối cùng.Nồng độ thấp và thời gian khử khối không đủ sẽ tạo ra nhóm DMT không phản ứng, làm giảm hiệu suất và tăng các tạp chất không mong muốn.Thời gian giải mã kéo dài có thể dẫn đến sự khử purin của các chuỗi tổng hợp, tạo thành các tạp chất không mong muốn.

Bước ghép nối rất nhạy cảm với hàm lượng nước trong dung môi và độ ẩm trong không khí.Nồng độ nước trong quá trình tổng hợp phải nhỏ hơn 40 ppm, tốt nhất là dưới 25 ppm.Để duy trì điều kiện tổng hợp khan, quá trình tổng hợp axit nucleic phải được thực hiện trong môi trường có độ ẩm thấp, vì vậy chúng tôi khuyên khách hàng nên sử dụngThiết bị hòa tan amitit, có thể hòa tan Phosphoramidite dạng bột hoặc dầu trong acetonitril khan để tránh tiếp xúc với không khí.