Nguyên lý cơ bản của quá trình tổng hợp DNA

Quá trình tổng hợp DNA hóa học dựa trên chiến lược tổng hợp pha rắn và hóa học photphoramidite.Khác với quá trình tổng hợp DNA sinh học, vật liệu trong quá trình tổng hợp DNA hóa học là DMT (4, 4-dimethoxytrityl) và deoxyriboxyside biến đổi photphoramidite, như trong Hình 1. Quá trình tổng hợp DNA được thực hiện trên chất hỗ trợ vững chắc (chúng tôi có thể cung cấp nhiều loạiCột tổng hợp Oligo), tức là CPG (thủy tinh lỗ rỗng được kiểm soát) và PS (polystyrene), và toàn bộ quá trình tổng hợp được thực hiện trên mộtBộ tổng hợp DNA/RNA, là thiết bị chính của chúng tôi, có các kiểu máy khác nhau như: Bộ tổng hợp kênh đơn HY, HY-12, HY-192, v.v., hướng tổng hợp là từ 3' đến 5' và một nucleotide được đưa vào bộ phận hỗ trợ vững chắc thông qua một chu kỳ tổng hợp.Một chu trình tổng hợp thông thường bao gồm bốn bước, Khử bảo vệ, Ghép nối, Đóng nắp và Oxy hóa (Hình 2).Deprotection được thiết lập để loại bỏ nhóm DMT trên chất mang rắn hoặc nhóm 5' hydroxyl trên nucleoside trước đó, axit trichloroacetic 3% trong dichloromethane được sử dụng làm thuốc thử khử bảo vệ.Sau đó, deoxyriboxyside biến đổi photphoramidite được phép tiếp xúc với nhóm hydroxyl với sự hỗ trợ của chất kích hoạt, tức là 5-ethylthiotetrazole hoặc 4, 5-dicyanoimidazole, tạo thành phosphitetriester (III) và thực hiện bước Khớp nối.Bước giới hạn được thực hiện để chặn nhóm hydroxyl không phản ứng trong bước ghép nối, nhằm giảm thiểu sự hình thành các chuỗi khuyết tật không mong muốn.Cuối cùng, photphittriester (III) không ổn định bị oxy hóa thành phosphittriester ổn định hóa học (V) với iốt là chất oxy hóa trong sự hiện diện của pyridin.

DNA tổng hợp có thể được tách ra khỏi chất mang rắn bằng quá trình phân giải amino, nhóm được bảo vệ 2-cyanoethyl trên photphortriester và amit trên nucleobase được tách ra cùng lúc, các Tấm tổng hợp và Cột tổng hợp trong các giá được đặt trực tiếp vào buồng phản ứng sau đóThiết bị hủy bảo vệ.DNA thô có thể được chuẩn bị bằng HPLC, điện di và OPC theo yêu cầu, chúng tôi cũng có thể cung cấp cho bạnThiết bị thanh lọcđể xử lý hậu kỳ.