Nguyên tắc tổng hợp axit nucleic

Quá trình tổng hợp axit nucleic được thực hiện bằng phương pháp triglycerid sialic amide pha rắn, nhờ đó đầu 3’ của DNA được cố định trên chất nền pha rắn và các nucleotide được thêm vào theo hướng 3’ đến 5’ cho đến khi đoạn DNA mong muốn được tổng hợp. .Điều này khác với quá trình tổng hợp DNA bằng cách sử dụng DNA polymerase.

Đầu 3′ của bazơ thứ nhất được cố định trên CPG trong quá trình tổng hợp, đầu 5′-OH của bazơ tiếp theo được bảo vệ bằng di-p-tolyl trityl DMT, nhóm amino trên bazơ được bảo vệ bằng axit benzoic và đầu 3′ -OH sau đó được kích hoạt bằng hợp chất amino photphat.1 bazơ của 5 5′-OH của 1 bazơ và 3′-OH của bazơ tiếp theo tạo thành triglycerid photphit, chất này sau đó bị oxy hóa bằng iốt thành triglycerid photphat, chất bảo vệ trên bazơ thứ hai 5′-OH bị loại bỏ bằng cách thêm axit dichloroacetic DM quay vòng thông qua việc bổ sung bazơ tiếp theo và sau khi tổng hợp, chất bảo vệ trên 5′-OH được loại bỏ bằng axit yếu Mảnh được tách ra khỏi nhựa rắn bằng amoni hydroxit đậm đặc, chất bảo vệ được loại bỏ khỏi bazơ với amoni hydroxit đậm đặc khi đun nóng, amoni hydroxit được loại bỏ, mảnh được sấy khô trong chân không và axit nucleic được tinh chế bằng sắc ký lỏng hoặc TRANG.

Các bước tổng hợp Oligo

Gỡ chặn

CácNhóm bảo vệ DMT 5 đầu được loại bỏ bằng cách thêm giải pháp TCA.

Kích hoạt

Trộn chất kích hoạt với monome oligonucleotide để tạo thành monome oligonucleotide hoạt động trung gian.

Khớp nối

Nhóm hydroxyl 5 đầu phản ứng với chất trung gian oligonucleotide hoạt động trong phản ứng ngưng tụ chống tạo để tạo thành liên kết triglycerid photphit không ổn định.

giới hạn 

Việc bổ sung chất tạo nắp sẽ thực hiện phản ứng tạo nắp acetyl hóa với các nhóm hydroxyl dư không tham gia vào phản ứng ngưng tụ.

Quá trình oxy hóa 

Việc bổ sung dung dịch iốt chứa nước sẽ phản ứng với các liên kết photphit không ổn định bằng quá trình oxy hóa để tạo thành liên kết triglycerid axit photphoric ổn định.

Sự phân tách Cyanoetyl

Sản phẩm axit nucleic sau khi tổng hợp có thêm dung dịch DEA ​​để loại bỏ nhóm cyanoethyl khỏi liên kết triglycerid photphat.

Bị cắt và bảo vệ

Các mảnh axit nucleic được tách ra khỏi chất mang pha rắn bằng cách thêm dung dịch amoni hydroxit đậm đặc và sau đó đun nóng để loại bỏ các nhóm bảo vệ khỏi liên kết hydro của các bazơ.